Como redefinir uma coluna C18

A cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) é uma ferramenta para separar produtos químicos de uma mistura. A separação e identificação de produtos químicos específicos dentro de uma mistura ocorrem principalmente na coluna HPLC no sistema. Muitos tipos de colunas estão disponíveis para sistemas HPLC e cada tipo é destinado a um tipo específico de análise. A coluna C18 é a coluna não polar mais forte que é geralmente usada. Após o uso contínuo por um período prolongado, a vazão do solvente através da coluna diminui e o tempo analítico para uma análise aumenta. Outra causa da desaceleração de uma análise é ter amostras que deixam pequenas quantidades de produtos químicos no material da coluna e reduzem a capacidade da coluna de separar os produtos químicos. A regeneração da superfície da coluna é realizada tratando o material de embalagem com uma série específica de solventes para limpar as amostras restantes na coluna e revitalizar o material de suporte.

Passo 1

Desconecte a coluna C18 da corrente de fluxo e substitua a coluna na direção reversa. A passagem do solvente pela coluna na direção oposta afrouxará o efeito da embalagem que ocorre com o tempo. Deve-se tomar cuidado para não perder uma grande quantidade de material de embalagem do final da coluna. Alguns fabricantes usam uma malha maior na extremidade a montante da coluna, de modo que, quando a direção do fluxo é revertida, a malha maior fica na posição a jusante. Esse método de regeneração é chamado de retrolavagem. Para proteger contra o material da embalagem que flui para o detector do sistema e possivelmente causar um plugue,

Etapa 2

Coloque o tubo de entrada de solvente em uma série de solventes para eluir os compostos retidos com a coluna na direção inversa. As séries de solventes utilizados variam em suas características hidrofílicas. Variando os solventes, você elui compostos de natureza hidrofílica igualmente variada. Use 50 ml de cada um dos seguintes solventes sucessivamente: água (se você estiver usando um tampão em seu solvente), metanol, isopropanol, diclorometano, hexano, diclorometano e isopropanol.

Etapa 3

Reconecte a coluna na orientação correta e passe o solvente pelo sistema. Use pelo menos 75 ml de solvente para lavar a coluna antes de prosseguir. Execute um teste de injeção de um padrão que você executou quando a coluna era nova e verifique os resultados. Preste atenção especial às horas máximas de retenção, às caudas de pico e ao tempo total de análise. O grau em que esses atributos coincidem com a execução inicial da coluna quando era nova indicará o grau em que a coluna foi regenerada. Se os resultados não forem satisfatórios, substitua a coluna por uma nova e jogue a coluna antiga no lixo.

Referências

 

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